产品简介:
快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF 或硝纤膜)上。
使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法,能在 15-35min 完成转膜过程。
快速和环保:快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。
兼容性好:快速转膜液能兼容 Laemmli 胶,预制胶,Bis-Tris 胶等多种凝胶。
转移效率高:快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了
大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
使用说明:
转膜前的准备:5-6张裁好的滤纸;裁好的转印膜;足够的1×快速转移buffer
一 湿转法(Tank blot):
1 按照下表配制1×快速转膜液
| 1×快速转膜液配制量 |
| 100 ml | 500 ml | 1000 ml |
10×快速转膜液 | 10 ml | 50 ml | 100 ml |
无水乙醇 | 20 ml | 100 ml | 200 ml |
超纯水 | 70 ml | 350 ml | 700 ml |
2 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿。
3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)→一块海绵→2mm滤纸→凝胶→转印膜→1mm滤纸→一块海绵(根据三明治的厚度选择是否使用)→正极(阳极)
注意:
① 要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
② PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
③ 三明治结构的制作不能太紧,也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话,可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。
5 将三明治结构放于转移槽中。
注:转移槽中可以不用1×快速转膜液,可以用1×TGS(Tris-Glycine-SDS)电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。
二 半干转(Semi-dry blot):
1 按照下表配制1×快速转膜液:
| 1×快速转膜液配制量 |
| 100 ml | 500 ml | 1000 ml |
10×快速转膜液 | 10 ml | 50 ml | 100 ml |
无水乙醇 | 20 ml | 100 ml | 200 ml |
超纯水 | 70 ml | 350 ml | 700 ml |
2 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿。
3 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)→下层滤纸 →凝胶 →转印膜 →上层滤纸 →正极(阳极)
半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触;滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。
注意:PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
三 转移条件:
推荐使用恒流转移
电流 | 转移时间 |
300 mA | 30 to 35 min |
330 mA | 25 to 30 min |
350 mA | 25 to 30 min |
375 mA | 20 to 25 min |
400 mA | 15 to 20 min |
仅供研究使用。不得用于动物或人类的诊断或治疗。