产品简介:
苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。
无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。
使用说明:
一. 需要用户自己准备的试剂
1. 固定液:4%多聚甲醛固定液。
2. 分化液(盐酸乙醇分化液或5%的乙酸溶液或0.5%的盐酸乙醇);
3. 如果需要脱水、透明和封片处理,还需自备二甲苯,和封片剂(如 PVP封片液、 抗荧光淬灭封片液或中性树胶等其它封片剂),及80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇;
4. 70%乙醇。
二. 样品处理
a. 对于石蜡切片:
二甲苯中脱蜡5-10分钟 → 换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟→无水乙醇5分钟→90%乙醇2分钟→80%乙醇2分钟→70%乙醇2分钟→蒸馏水2分钟。
b. 对于冰冻切片:
固定液固定10分钟以上→蒸馏水2分钟。
c. 对于培养细胞:
固定液固定10分钟以上→蒸馏水洗涤2分钟→换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
三. 苏木素染色
对于上述处理好的样品:
a. 苏木素染色液染色5-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。
b. 浸自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟。
c. 蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。
d. 选做:根据不同分化液的分化时间,分化约2-30秒,自来水冲洗10分钟。
此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 注:如果用于免疫组化等染色后的复染,可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行苏木素染色。
四. 脱水、透明、封片或进行其它染色
a. 脱水、透明、封片:
70%乙醇10秒→80%乙醇10秒→90%乙醇10秒→无水乙醇10秒→二甲苯透明5分钟→换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟→用中性树胶或其它封片剂封片→显微镜下观察,细胞核呈蓝色。
b. 进行其它染色:
如果进行免疫荧光染色,或进行Hoechst等荧光染料的染色,在苏木素染色液染色后:
70%乙醇洗涤2次,每次2分钟。
PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。
然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。如果免疫荧光染色效果不佳,可能染料对抗体结合有影响,请单独染色。
注意事项:
1、气温较低时苏木素染色不易着色,可适当延长染色时间。
2、试剂盒储存时,避免高、低温及阳光直射。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
常温保存,一年有效。
仅供研究使用。不得用于动物或人类的诊断或治疗。